SIEMBRA EN MEDIO KIA EN PICADURA

FUNDAMENTO:

Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiología de alimentos para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa y lactosa, y a la producción de ácido sulfhídrico.

En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tíosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe ³⁺, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y  producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenól es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenól, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tíosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.

MATERIALES Y REACTIVOS

-papel de filtro

-mechero bunsen

-asa de siembra

-gradilla

-muestra tubo 5 y 11

agár  con medio KIA 

inclinado en tubo.

-previamente

preparado.

                                                         

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Peptona de carne	13.0	Suspender  54.8 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.
Cloruro de sodio	5.0
Lactosa	10.0
Tripteina	10.0
Glucosa	1.0
Citrato de hierro y amonio	0.5
Tiosulfato de sodio	0.3
Rojo de fenol	0.025
Agar	15.0
pH final: 7.3 ± 0.2

PROCEDIMIENTO:

Preparamos el material en el banco de trabajo.

-Encendemos el mechero bunsen creando un área de esterilidad para realizar la técnica de sembrado.

-Esta siembra la realizaremos en picadura,realizando los mismos pasos que en una siembra en tubo,a diferencia,de que al introducir el asa inoculada con nuestra muestra,debemos en primer lugar atravesar el medio a modo de pinchazo lo mas en el centro posible,una vez sacamos el asa del interior de medio,la agotamos en zig-zag hasta el final.

-incubamos en estufa a 37 grados.

                                     

MEDIDAS DE SEGURIDAD:

-Extremar la precaución a la hora de manejar el mechero bunsen

-Poner el material que vamos a necesitar,en un orden lógico,evitando así accidentes

-Utilizar los E.P.I

RESULTADOS:

nota: La lectura de los resultados es aconsejable realizar a las 36 horas,dado que si se excede el tiempo los componentes del medio se consumen y pueden llevar a falsos resultados.

Los resultados que obtuve en la siembra con la muestras del cultivo (tubo5) son los siguientes:

-pico rojo/fondo amarillo:la bacteria solamente fermenta la glucosa.

-se puede observar que el medio esta despegado del tubo de ensayo,lo cual me crea la duda de si la bacteria también es productora de gas,dado que visualizo ruptura del medio y formación de burbujas

A modo de recopilar todos los casos que se puede dar en este medio de cultivo ,incluyo una foto de un cultivo no realizado por mi.

En este caso podemos ver claramente que la bacteria produce ácido sulfhídrico por que observamos ennegrecimiento del medio