TINCIÓN DE WIRTZ-CONKLIN
FUNDAMENTO:
Las esporas son formas de resistencia que se forman en el interior del citoplasma de algunas bacterias,fundamentalmente de bacillus y clostridium
La pared de las esporas es bastante impermeables por lo que cuesta teñirlas( se refuerza la coloración gracias a un mordiente) pero una vez teñidas,tras la decoloración perderá el color toda la bacteria excepto las esporas siendo el objetivo principal ,la visualización de dichas esporas.
3. MATERIALES
- Papel de filtro
- Guantes
- 4 portaobjetos
- Mechero Bunsen
- Rejilla
- Torunda
- Colorantes Verde Malaquita al 5% y Safranina al 0,5%
- Piseta con agua destilada
- Microscopio
- Bacterias utilizadas: Bacteria 5, bacteria 11, Esp 1 y Esp 2
4. PROCEDIMIENTO
- Preparar una extensión fijada por calor
– Cogemos con ayuda del asa de siembra las bacterias tanto del tubo que contiene bacteria 5, 11, Esp 1 y Esp 2
– Se deposita en el porta mezclado con una gota de SSF, y se mezcla lo mas homogéneo posible
– Una vez realizada la extensión, la fijamos por calor
- Colocamos los portaobjetos con nuestras bacterias en una rejilla, y lo cubrimos con Verde Malaquita al 5%
- Calentamos por debajo con una torunda con alcohol durante 5 minutos
- Lavamos con abundante agua, eliminando los restos de colorante
- Cubrimos de nuevo con una solución de Safranina al 0,5%
- Lavamos con agua abundante el exceso de colorante y dejamos secar las preparaciónes
- Una vez estén los portaobjetos bien secos, los observamos al microscopio
MEDIDAS DE SEGURIDAD
- Utilizaremos los E.P.I
- Extremaremos la precaución a la hora de proceso de calentar y fijar el colorante con la torunda en llama.
5. RESULTADOS
- Bacteria 5: no hay presencia de endosporas, todas están fuera
- Bacteria 11: bacilos con endosporas
- Esp 1: presencia de esporas fuera de los bacilos
- Esp 2: cadena de bacilos (rojas) y endosporas (verdes)
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