PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

FUNDAMENTO

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismo.La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar,porque las necesidades nutricionales varían considerablemente .

Hay microorganismos muy poco exigentes  que crecen bien en medios de laboratorios normales y otros muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas,suero,sangre para crecer.

OBJETIVOS

1. Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de microorganismos in vítro

2. Manejar los instrumentos de uso rutinario,a la vez que inprescindibles,en los laboratorios de microbiología.

3.Hacer un primer acercamiento a la manipulación de microorganismos,adquirir la idea de la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y de seguridad y las técnicas mas comunes para realizarló.

MATERIAL Y REACTIVOS

- Papel de filtro

-Embudo

-Vidrio de reloj

-Varilla

-Microondas

-Placas de petri

-Balanza

-Probeta

-Botella Róux o matraz

-Frasco lavador con agua destilada

-Agár nutritivo (frasco comercial) y cucharilla

-Mechero bunsen

PROTOCOLO

Vamos a preparar 300ml de Agár nutritivo en placa,para ello,seguimos las indicaciones del fabricante,según estas,nos dice que para la preparación nos da como referencia el siguiente valor:

Para un 1L se le añade 23gr de A.N

con lo cual calcularemos cuanto necesitamos para 300ml.

23gr x300/1000 y nos da como resultado 6,9gr de A.N

PROCEDIMIENTO

-Preparamos todo el material necesario en el banco de trabajo.

-Pesamos el A.N en la balanza en un vidrio de reloj y llenamos la probeta con agua destilada hasta la cantidad necesaria

-Vertemos un poco de agua destilada que tenemos en la probeta a la botella Roux, luego colocamos el embudo,vertemos poco a poco el A.N con ayuda de un barilla y seguimos añadiendo el agua que nos queda en la probeta sobre el vidrio de reloj y el embudo para que no queden restos.

-Removemos y lo metemos en el microondas entre 1-2 min aprox hasta llevar a ebullición,los sacamos y volvemos a homogeneizar 
-Metemos nuestra preparación en el autoclave para esterilizarlo,cerrando nuestro botella un cuarto de vuelta,permitiendo así la entrada de vapor.

-Durante la esterilización rotulamos las placas de petri sin abrirlas poniendo fecha de la preparación y que contiene
-Una vez que ya enfrío el A.N nos colocamos una torre de placas en un lado,el mechero bunsen en el centro para crear un ambiente de esterilidad y en el otro lado la preparación.
-Una vez preparado todo esto,quitamos el tapón y lo colocamos hacia arriba ,pasamos la boca de la botella por la llama de mechero unos segundos y vamos vertiendo en las placas la cantidad necesaria.

MEDIDAS DE SEGURIDAD

Debemos tener en cuenta una serie de medidas de seguridad a la hora de realizar esta practica,ya que conlleva utiliza algunos instrumentos y aparatos

-Utilizaremos los E.P.I
-Debemos tener precaución con el tiempo en la utilización del microondas,si lo dejamos mucho tiempo puede derramarse.
-Tanto en el uso del microondas como el autoclave utilizaremos los guantes anti-quemaduras
Para el uso del autoclave debemos comprobar que tenga agua destilada en el fondo del mismo cubriendo la resistencia,seleccionar bien el programa 121grados durante 20min cerrando la válvula de drenaje y dejando abierta la de vapor hasta que alcance una temperatura de 90-100 grados.
-Hasta que no acabe el proceso y la temperatura haya descendido lo suficiente y veamos que el manómetro este a una atmósfera no podemos abrir el autoclave
-Cuando realizamos un proceso de esterilización ,utilizaremos para verificar que es proceso es correcto un testigo de tipo químico.

RESULTADO

Una vez acabamos todo el proceso ,obtenemos A.N en placa listo para ser cultivado.
Hasta que vayamos a utilizarlos se conservaran el frigorífico  envueltos en papel de aluminio.