TINCION DE GRAM

 FUNDAMENTO:
  La técnica de coloración de GRAM la empleamos para la visualización de bacterias,pudiendo identificar la morfología celular bacteriana como para su diferenciación bacteriana,considerándose bacterias GAM positivas a las que se visualizan de color morado y bacterias GAM negativas a las que se visualizan de color rojo o grosella o rosa,la pared celular bacteriana es la que determina la afinidad tintorial 



MATERIALES Y REACTIVOS:

  • Papel de filtro.
  • Mechero Bunsen
  • Portaobjetos
  • Asa de siembra
  • Suero fisiológico (SSF)
  • Cristalizador
  • Puente de tinción
  • Tinción Gram : Cristal Violeta, Lugol, Alcohol/ acetona, Safranina
  • Piseta con Agua destilada
  • Microscopio

4. PROCEDIMIENTO
  • Preparamos el banco de trabajo ( papel de filtro, Mechero Bunsen, cristalizador... )

  • Realizamos una extensión fijada por calor
.
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-Una vez tenemos la extensión preparada, se fija mediante calor con ayuda del Mechero Bunsen
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  • Una vez fijada la extensión, colocamos el porta con nuestra muestra en un cubeta  de tinción, en un cristalizador. Cubrimos nuestra muestra con el colorante Cristal Violeta, dejándolo actuar durante 1 minuto.

  • Al cabo de este tiempo, lavamos la preparación con agua del grifo, y se escurren.
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  • Una vez lavadas, cubrimos el portaobjetos con lugol, durante 1 minuto.
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  • Lavamos con agua del grifo y escurrimos

  • Cubrimos la preparación con una mezcla de alcohol/acetona en proporción 1:1 durante 30 segundos, y escurrirlas
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  • Lavar con agua del grifo y escurrir bien
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  • Por último, cubrimos con colorante Safranina durante 2 minutos, y volvemos a escurrir
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  • Lavamos con abundante agua del grifo, y dejamos secar a Tª ambiente.
  • Una vez seca nuestra extensión teñida, la observamos al microscopio.



MEDIDAS DE SEGURIDAD:

 - Utilizaremos los E.P.I. y extremaremos la precaución a la hora de utilizar el mechero bunsen  para la fijación de la muestra al porta.


5. RESULTADOS


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- En la observación microscópica identificamos bacterias GAM negativas

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