TINCION DE GRAM

 FUNDAMENTO:

  La técnica de coloración de GRAM la empleamos para la visualización de bacterias,pudiendo identificar la morfología celular bacteriana como para su diferenciación bacteriana,considerándose bacterias GAM positivas a las que se visualizan de color morado y bacterias GAM negativas a las que se visualizan de color rojo o grosella o rosa,la pared celular bacteriana es la que determina la afinidad tintorial 

MATERIALES Y REACTIVOS:

• Papel de filtro.
• Mechero Bunsen
• Portaobjetos
• Asa de siembra
• Suero fisiológico (SSF)
• Cristalizador
• Puente de tinción
• Tinción Gram : Cristal Violeta, Lugol, Alcohol/ acetona, Safranina
• Piseta con Agua destilada
• Microscopio

4. PROCEDIMIENTO

• Preparamos el banco de trabajo ( papel de filtro, Mechero Bunsen, cristalizador... )

• Realizamos una extensión fijada por calor

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-Una vez tenemos la extensión preparada, se fija mediante calor con ayuda del Mechero Bunsen

• Una vez fijada la extensión, colocamos el porta con nuestra muestra en un cubeta  de tinción, en un cristalizador. Cubrimos nuestra muestra con el colorante Cristal Violeta, dejándolo actuar durante 1 minuto.

• Al cabo de este tiempo, lavamos la preparación con agua del grifo, y se escurren.

• Una vez lavadas, cubrimos el portaobjetos con lugol, durante 1 minuto.

• Lavamos con agua del grifo y escurrimos

• Cubrimos la preparación con una mezcla de alcohol/acetona en proporción 1:1 durante 30 segundos, y escurrirlas

• Lavar con agua del grifo y escurrir bien

• Por último, cubrimos con colorante Safranina durante 2 minutos, y volvemos a escurrir

• Lavamos con abundante agua del grifo, y dejamos secar a Tª ambiente.
• Una vez seca nuestra extensión teñida, la observamos al microscopio.

MEDIDAS DE SEGURIDAD:

- Utilizaremos los E.P.I. y extremaremos la precaución a la hora de utilizar el mechero bunsen  para la fijación de la muestra al porta.

5. RESULTADOS

- En la observación microscópica identificamos bacterias GAM negativas