INVIC
FUNDAMENTO: PRUEBA DEL INDOL EN AGUA DE PEPTONA
La triptófanasa es una enzima que degrada el triptófano,en esta degradación se libera (indol)para detectar si la bacteria les capaz de degradar este aminoácido se usa un reactivo,denominado KOVAC,que reacciona con el indol formando un compuesto de color rosa.
MATERIAL Y REACTIVOS:
-papel de filtro
-pipeta pasteur
gradilla
-medios de cultivo (agua de peptona)
-muestras(tubo 5 y 11)
PROCEDIMIENTO:
-inocular dos tubos con agua de peptona,uno con la muestra del tubo 5 y otro del tubo 11
-incubar durante 24-48 horas.
-añadimos 5 gotas de reactivo KOVAC en cada tubo y agitamos suavemente.
RESULTADOS:
Banda de color amarillo:indol negativo,nuestras bacterias no son capaces de degradar el triptófano.
Para que fuera positivo,la banda deberia de ser de color rosa intenso o rojo violeta,pudiendo en este caso ,degradar el triptófano
FUNDAMENTO:prueba de utilización de citrato.
Esta prueba valora si una bacteria es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo.
La prueba se realiza con agár citrato de Simons que contiene citrato de sodio y azul de bromotimol como indicador de PH
MATERIALES:
-papel de filtro
-medio de cultivo de citrato
-muestras (tubo 5 y 11 )
-mechero bunsen
-asa de siembra
PROCEDIMIENTO:Prepararemos el material en el banco de trabajo.
-Realizaremos la técnica de sembrado en tubo como ya sabemos (vease en practica siembra en medio inclinado)
-Una vez sembrado ,incubaremos durante 24-48 horas
RESULTADOS:
El medio de citrato normal es de color verde,podemos observar en los tubos que realizamos la practica ,no apreciamos cambio de color.con lo cual es citrato NEGATIVA.
nuestras bacterias no utilizan en citrato en ningún proceso metabólico.
para que hubiese sido citrato positiva,el medio deberia estar de colo azul intenso,es decir, el medio se acidifica por el metabolismo del citrato.
FUNDAMENTO: prueba Vorges Proskauer
Esta prueba se realiza para detectar la capacidad de una bacteria de fermentar la glucosa por via butanodiólica,para detectar este tipo de fermentación ,se usa alfa-naftol,que es un compuesto que reacciona con un producto intermedio de la fermentación butanodiólica,la acetoína ,para formar un compuesto de color rojizo.
MATERIAL:
-papel de filtro
-medio de cultivo MRVP
-muestras (tubo 5 y 11 )
-reactivos: alfa naftol (VPB) y KOH (UPA)
PROCEDIMIENTO:
-tras haber inoculado e incubado durante 24-48 horas el medio de MRVP que es un medio liquido que contiene glucosa.
procedemos a realizar la técnica.
-de los dos medios sembrados uno,con la muestra del tubo 5 y otra con la muestras del tubo 11,,le aplicaremos en primer lugar 12 gotas de VPB al 5% y en segundo lugar 4 gotas de UPA al 40%
-esperamos 5-10 minutos antes de realizar la lectura.
RESULTADOS:
nota: los medios después de añadir los reactivo y agitar,se dejan destapados e inclinados con ayuda de una gradilla,ya que el oxigeno es muy importante para el proceso y lo obtención de resultados.
-nuestros del tubos están de color amarilla,lo que quiere decir,NEGATIVA a acetoína.
y por tanto,a la fermentación de la glucosa por la via butanodiólica.
-para que la prueba hubiera sido POSITIVA,el medio tendría que estar de color rosado.
FUNDAMENTO:prueba de rojo metilo
Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de una bacteria de fermentar la glucosa por la via ácido mixta,con producción de ácido.
Para detectar si se han producido esos ácidos se utiliza un indicador de PH,el rojo metilo,que actúa entre un PH 4,2 rojo y 6,3 amarillo
MATERIAL:
-papel de filtro
medios de cultivo (MRVP)
muestra tubo 11 y 5
-rojo de metilo
PROCEDIMIENTO:
Con los medios MRVP ya inoculados y incubados durante 24-48 horas,procedemos a realizar la técnica con el rojo metilo
-ponemos en cada tubo 5 gotas de rojo metilo,agitamos y efectuamos la lectura-
RESULTADOS:
formación de anillo de color rojizo es POSITIVO ya que fermenta la glucosa por la via ácido mixta.
en el caso de ser negativa el anillo formado debería de ser amarilllo.
MEDIDAS DE SEGURIDAD:
-En todas la técnicas que hemos realizado,debemos extremar la precaución en cuanto a la utilización del mechero bunsen en las técnicas que lo hayan requerido y usa en todo momento los E.P.I ya que trabajamos con reactivos que pueden ser corrosivos en contacto con la piel y mucosas.también y no menos importante,todo el material y reactivos empleados deben de estar en un orden lógico de empleo y bien señalados y rotulados nuestras muestras.
La triptófanasa es una enzima que degrada el triptófano,en esta degradación se libera (indol)para detectar si la bacteria les capaz de degradar este aminoácido se usa un reactivo,denominado KOVAC,que reacciona con el indol formando un compuesto de color rosa.
MATERIAL Y REACTIVOS:
-papel de filtro
-pipeta pasteur
gradilla
-medios de cultivo (agua de peptona)
-muestras(tubo 5 y 11)
PROCEDIMIENTO:
-inocular dos tubos con agua de peptona,uno con la muestra del tubo 5 y otro del tubo 11
-incubar durante 24-48 horas.
-añadimos 5 gotas de reactivo KOVAC en cada tubo y agitamos suavemente.
RESULTADOS:
Banda de color amarillo:indol negativo,nuestras bacterias no son capaces de degradar el triptófano.
Para que fuera positivo,la banda deberia de ser de color rosa intenso o rojo violeta,pudiendo en este caso ,degradar el triptófano
FUNDAMENTO:prueba de utilización de citrato.
Esta prueba valora si una bacteria es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo.
La prueba se realiza con agár citrato de Simons que contiene citrato de sodio y azul de bromotimol como indicador de PH
MATERIALES:
-papel de filtro
-medio de cultivo de citrato
-muestras (tubo 5 y 11 )
-mechero bunsen
-asa de siembra
PROCEDIMIENTO:Prepararemos el material en el banco de trabajo.
-Realizaremos la técnica de sembrado en tubo como ya sabemos (vease en practica siembra en medio inclinado)
-Una vez sembrado ,incubaremos durante 24-48 horas
RESULTADOS:
El medio de citrato normal es de color verde,podemos observar en los tubos que realizamos la practica ,no apreciamos cambio de color.con lo cual es citrato NEGATIVA.
nuestras bacterias no utilizan en citrato en ningún proceso metabólico.
para que hubiese sido citrato positiva,el medio deberia estar de colo azul intenso,es decir, el medio se acidifica por el metabolismo del citrato.
FUNDAMENTO: prueba Vorges Proskauer
Esta prueba se realiza para detectar la capacidad de una bacteria de fermentar la glucosa por via butanodiólica,para detectar este tipo de fermentación ,se usa alfa-naftol,que es un compuesto que reacciona con un producto intermedio de la fermentación butanodiólica,la acetoína ,para formar un compuesto de color rojizo.
MATERIAL:
-papel de filtro
-medio de cultivo MRVP
-muestras (tubo 5 y 11 )
-reactivos: alfa naftol (VPB) y KOH (UPA)
PROCEDIMIENTO:
-tras haber inoculado e incubado durante 24-48 horas el medio de MRVP que es un medio liquido que contiene glucosa.
procedemos a realizar la técnica.
-de los dos medios sembrados uno,con la muestra del tubo 5 y otra con la muestras del tubo 11,,le aplicaremos en primer lugar 12 gotas de VPB al 5% y en segundo lugar 4 gotas de UPA al 40%
-esperamos 5-10 minutos antes de realizar la lectura.
RESULTADOS:
nota: los medios después de añadir los reactivo y agitar,se dejan destapados e inclinados con ayuda de una gradilla,ya que el oxigeno es muy importante para el proceso y lo obtención de resultados.
-nuestros del tubos están de color amarilla,lo que quiere decir,NEGATIVA a acetoína.
y por tanto,a la fermentación de la glucosa por la via butanodiólica.
-para que la prueba hubiera sido POSITIVA,el medio tendría que estar de color rosado.
FUNDAMENTO:prueba de rojo metilo
Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de una bacteria de fermentar la glucosa por la via ácido mixta,con producción de ácido.
Para detectar si se han producido esos ácidos se utiliza un indicador de PH,el rojo metilo,que actúa entre un PH 4,2 rojo y 6,3 amarillo
MATERIAL:
-papel de filtro
medios de cultivo (MRVP)
muestra tubo 11 y 5
-rojo de metilo
PROCEDIMIENTO:
Con los medios MRVP ya inoculados y incubados durante 24-48 horas,procedemos a realizar la técnica con el rojo metilo
-ponemos en cada tubo 5 gotas de rojo metilo,agitamos y efectuamos la lectura-
RESULTADOS:
formación de anillo de color rojizo es POSITIVO ya que fermenta la glucosa por la via ácido mixta.
en el caso de ser negativa el anillo formado debería de ser amarilllo.
MEDIDAS DE SEGURIDAD:
-En todas la técnicas que hemos realizado,debemos extremar la precaución en cuanto a la utilización del mechero bunsen en las técnicas que lo hayan requerido y usa en todo momento los E.P.I ya que trabajamos con reactivos que pueden ser corrosivos en contacto con la piel y mucosas.también y no menos importante,todo el material y reactivos empleados deben de estar en un orden lógico de empleo y bien señalados y rotulados nuestras muestras.
Comentarios
Publicar un comentario