SIEMBRA EN MEDIOS DE CULTIVO ( E.M.B;LEVINE Y AGAR SANGRE

FUNDAMENTO:
La técnica de siembra en medio de cultivo consiste en depositar material bacteriológico para promover su crecimiento y multiplicación,en este caso,vamos a utilizar tres tipos de medios de cultivo,con la intención de poder observar que tipo de bacteria se multiplicara dependiendo de la afinidad de la bacteria al medio en el que se encuentra

AGAR LEVINE:

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Peptona	10.0	Suspender 37,4 g de polvo por litro de agua destilada, dejar reposar 5 minutos. Calentar a ebullición hasta disolución total. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121°C.
Lactosa	10.0
Fosfato dipotásico	2.0
Agar	15.0
Eosina	0.4
Azul de metileno	0.065
pH final:7.1 ± 0.2

AGAR EMB:

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Peptona	10.0	Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos; mezclar, calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos hasta su disolución. Esterilizar en autoclave a no más de 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°C y distribuir agitando suavemente.
Lactosa	5.0
Sacarosa	5.0
Fosfato dipotásico	2.0
Agar	13.5
Eosina	0.4
Azul de metileno	0.065
pH final: 7.2 ± 0.2

AGAR SANGRE:

Fórmula (en gramos por litro)
Infusión de músculo de corazón	375.0
Peptona	10.0
Cloruro de sodio	5.0
Agar	15.0
pH final: 7.3 ± 0.2

-El medio EMB,presenta carbohidrátos como la lactosa y sacarosa,pudiendo aislar seléctivamente a enterobácterias  y otras especies de bacilos GRAMnegativos

-El medio LEVINE es un medio que no contiene sacarosa pero tiene un incremento de lactosa,permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras,la combinación de eosína y azul de metíleno,inhibe el crecimiento tanto de bacterias GRAM positiva y negativas

-El medio A.SANGRE es un medio permite el crecimiento de las bacterias GRAMpositivas y su detección por la producción de hemólisis.

MATERIALES:

-papel de filtro 

-mechero bunsen

-asa de siembra

-gradillas 

-placas petri con (EMB,LEVINE Y SANGRE)

-muestra de siembra en tubo 5 y 11

PROCEDIMIENTO:

A nuestro grupo de clase nos toco preparar el medio de cultivo LEVINE de la siguiente forma:

-Si en el envase comercial nos dice que para preparar 1 litro se necesita 37,5gr y nosotros vamos a preparar 250ml

             37,5-----------1000ml

               x--------------250ml             X=9,3gr para 250ml

el procedimiento de preparación,vease en practicas anteriores

procedimiento de siembra en los distintos medios:

Encendemos el mechero bunsen creando un ambiente de esterilidad,seguidamente cogemos con una mano el tubo que contiene la muestras y en la otra el asa de siembra,procedemos a su esterilización con la llama del mechero,enfriamos y cogemos una muestras,pasamos la boca de tubo por la llama y tapamos.

seguidamente dejamos el tubo y cogemos la placa petri que contiene el medio que cultivo en el que vamos a sembrar,la siembra se realiza en forma de zig-zag y por agotamiento,tapamos y esterilizamos el asa,(repetimos el proceso con el resto de medio y muy importante,mientras se realiza la técnica del sembrado no se puede hablar para evitar contaminar el el medio.

MEDIDAS DE SEGURIDAD:

Extremar la precaución cuando utilicemos el microondas en la preparación del medio,cuidado al usar el autoclave  para esterilizar el medio y con el mechero bunsen a la hora de realizar la siembra,poniendo el material de trabajo en un orden lógico y ordenado y siempre utilizar los E.P.I. en todos estos procesos según sean necesarios.

RESULTADOS:

trascurridos 24-48 horas obtenemos:

-en la siembra con agar sangre observamos proceso hemolítico,con lo cual podemos decir que tenemos bacterias GRAM positivas.( tubo 5)

-en la siembra en agar EMB obtenemos muy poco crecimiento,pero nos hace pensar que tenemos colonias de lactosa positivas porque observamos puntos o centros oscuro y la periferia transparente e incolora.(tubo11)

-en la siembra de cultivo LEVINE no obtuvimos ningún tipo de crecimiento bacteriano.(tubo11)